PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。通過DNA基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達(dá)納米級(jí)別，精確檢測(cè)乙肝病毒在患者體內(nèi)存在的數(shù)量、是否復(fù)制、是否傳染、傳染性有多強(qiáng)、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時(shí)判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗(yàn)依據(jù)。

　　開展PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的條件

　　1、必須擁有標(biāo)準(zhǔn)的的PCR熒光實(shí)驗(yàn)室;

　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出　　由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用。

　　2、檢測(cè)設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)PCR熒光實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求;

　　熒光定量PCR儀+實(shí)時(shí)熒光定量試劑+通用電腦+自動(dòng)分析軟件，構(gòu)成PCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)。

　　3、必須通過國家臨床檢驗(yàn)中心的驗(yàn)收和認(rèn)證;

　　4、檢測(cè)人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務(wù)培訓(xùn)并取得合格證書;

　　PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作人員必須參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗(yàn)中心舉辦的臨床基因擴(kuò)增培訓(xùn)班，并持證上崗。PCR實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收，實(shí)驗(yàn)室至少必須應(yīng)有兩個(gè)以上持有“臨床基因檢測(cè)上崗證”。PCR實(shí)驗(yàn)室必須建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序(SOP)、建立系列質(zhì)量管理文件等，確保實(shí)驗(yàn)室日常運(yùn)行符合國家衛(wèi)生部的要求，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、確保實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生安全，確保實(shí)驗(yàn)室長期穩(wěn)定運(yùn)行

　　5、必須在無菌無塵環(huán)境下進(jìn)行操作

　　下面介紹如何建立PCR實(shí)驗(yàn)室

　　1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)

　　這個(gè)區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采取預(yù)防措施：

　?、臥CR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。

　?、平M織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。

　?、怯糜跇悠诽幚淼墓ぞ卟荒鼙挥米髌胀ǚ肿涌寺〉墓ぞ?，也不能用作操作靶序列。

　　⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。

　　⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無菌一次性移液管吸取。

　?、使茏哟蜷_前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。

　?、巳魏螘r(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。

　　2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCRRNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。

　　3、建立前PCR區(qū)。

　　該去專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)，這個(gè)區(qū)域必須保持干凈，而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。

　　4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作。

　?、潘玫乃腥芤憾紤?yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

　　⑵所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。

　?、窃?0℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。

　　⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。

　?、伤性噭┖蜆悠窚?zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。

　?、市屡渲频脑噭┰谟糜跍?zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。

　?、藰悠窚?zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。

　　5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物。

　?、趴梢园鸭纯炭捎玫摹爸骰旌衔铩比芤号浜?、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。

　?、迫绻愕膶?shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。

　?、亲鳛橐粋€(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對(duì)照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。

　　⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。

　?、僧?dāng)做陽性對(duì)照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用最少數(shù)量的核酸。

　?、视捎诒仨氂袑?duì)照反應(yīng)，對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。

　　6、控制污染的方法。

　　已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線，這種方法不能完全消除污染問題，但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。

　　7、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個(gè)專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的，決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)。